白介素-6 ELISA KIT
白介素-6 ELISA KIT 是一款用于定量檢測生物樣本中白介素 - 6 含量的工具，在免疫學、炎癥研究等科研領域應用廣泛。以下為你展開介紹：
檢測原理：采用雙抗體夾心 ELISA 技術。試劑盒中的酶聯板已預包被抗 IL-6 特異性抗體。加入樣本后，樣本中的 IL-6 與固相抗體特異性結合，形成抗原 - 抗體復合物。隨后加入酶標記的抗 IL-6 抗體，其與已結合在固相抗體上的 IL-6 進一步結合，形成 “固相抗體 - IL-6 - 酶標抗體" 的夾心結構。經過洗滌步驟，去除未結合的物質，再加入底物溶液（如 TMB）。在酶的催化下，底物發生顯色反應，顏色的深淺與樣本中 IL-6 的含量成正比。通過酶標儀在特定波長（通常為 450nm）下測量吸光度，與標準曲線對比，即可計算出樣本中 IL-6 的濃度 。
試劑盒組成
酶聯板：有 96 孔或 48 孔規格，預包被抗 IL-6 抗體，是反應的載體。
標準品：一般為凍干品，通常有 2 瓶。臨用前需用標準品稀釋液復溶，并稀釋成不同濃度梯度，如 0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL 等，用于繪制標準曲線 。
樣本xi釋液：用于稀釋濃度過高的待測樣本，確保樣本濃度在試劑盒的檢測范圍內。
酶標抗體：即 HRP 標記的抗 IL-6 抗體，為濃縮液，需使用酶標抗體稀釋液按要求進行稀釋。
酶標抗體稀釋液：專門用于稀釋酶標抗體。
底物溶液：如 TMB 底物，與酶標抗體中的 HRP 發生反應產生顏色變化 。
洗滌液：多為濃縮液，使用時需按比例用蒸餾水或去離子水稀釋，用于洗滌酶聯板，去除未結合的物質，降低背景干擾 。
終止液：一般為強酸溶液（如硫酸），用于終止底物的顯色反應，使反應液顏色穩定，便于讀數 。
封板膜：在溫育過程中覆蓋酶聯板，防止液體蒸發和外界污染 。
使用說明書：詳細介紹試劑盒的使用方法、注意事項、性能指標等 。
樣本要求
血清：采集血液后，室溫放置 2 小時或 4℃過夜，1000×g 離心 20 分鐘，取上清備用。采血應使用無熱原、無內毒素的一次性器材 。
血漿：可用乙二胺四乙酸（EDTA）、肝素等抗凝劑。樣本采集后 30 分鐘內，在 2 - 8℃下 1000×g 離心 15 分鐘，取上清 。
細胞培養上清：將細胞培養上清 1000×g 離心 20 分鐘，去除細胞碎片和雜質后，取上清用于檢測 。
組織勻漿：用預冷的磷酸鹽緩沖液（PBS，0.01M，pH = 7.4）沖洗組織，去除殘留血液。剪碎組織后，按 1:9（w/v）加入 PBS，在冰上充分研磨。再經 5000×g 離心 5 - 10 分鐘，取上清用于檢測 。
樣本采集后若短期內檢測，可保存于 4℃；若需長時間保存，需置于 - 20℃或 - 80℃凍存，且要避免反復凍融，溶血樣本一般不適合檢測 。
操作流程
準備工作：從冰箱取出試劑盒，提前 30 分鐘平衡至室溫。同時，將濃縮洗滌液按要求比例用蒸餾水或去離子水稀釋備用 。
加樣：設置空白孔、標準品孔和樣本孔?？瞻卓准尤霕颖緓i釋液，標準品孔加入不同濃度的標準品，樣本孔加入處理好的樣本，每孔加樣量通常為 100μL，輕輕混勻，37℃溫育 90 分鐘 。
洗滌：溫育結束后，棄去孔內液體，用洗滌液加滿各孔，浸泡 1 - 2 分鐘后甩干，重復洗滌 5 次，確保che底洗凈未結合物質 。
加酶標抗體：每孔加入 100μL 稀釋好的酶標抗體工作液，37℃溫育 60 分鐘 。
再次洗滌：重復上述洗滌步驟 。
顯色：每孔加入 90μL 底物溶液，輕輕混勻，37℃避光顯色 15 - 30 分鐘（需根據實際顯色情況判斷） 。
終止反應：每孔加入 50μL 終止液，此時溶液顏色由藍色變為黃色 。
讀數：在加終止液后 15 分鐘內，用酶標儀在 450nm 波長處測量各孔的吸光度（OD 值） 。
計算結果：以標準品濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，繪制標準曲線。根據樣本的 OD 值從標準曲線中查出對應的濃度，若樣本進行了稀釋，需乘以相應的稀釋倍數，從而得到實際濃度 。
性能指標
檢測范圍：不同試劑盒有所差異，常見的檢測范圍為 15.6 - 1000 pg/mL 等區間，可滿足多種樣本中 IL-6 含量的檢測需求 。
靈敏度：一般可低至 7.8 pg/mL 甚至更低，能夠檢測到樣本中微量的 IL-6 。
特異性：對 IL-6 具有高度特異性，與其他細胞因子等物質幾乎無交叉反應 。
重復性：板內變異系數一般小于 10%，板間變異系數小于 15%，保證了檢測結果的穩定性和可靠性 。
產品型號：
更新時間：2025-07-04
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1888
當前位置：
上一個：
返回列表
