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      • 1Click Chemistry?

      1Click Chemistry?
      產品簡介:

      上海拜力生物1Click Chemistry?品牌代理專業經營進口胎牛血清、細胞因子、ELISA試劑盒、細胞、抗體、生物試劑、耗材、培養基、一抗、二抗、其產品吸附均勻,吸附性好,空白值低,孔底透明度高,代做ELISA實驗等。完善的庫存及供應體系以及高效穩定的純化技術,保證產品均能現貨供應和產品質量的穩定性。

      產品型號:

      更新時間:2025-06-21

      廠商性質:生產廠家

      訪 問 量 :316

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      1Click Chemistry

      上海拜力生物1Click Chemistry品牌代理專業經營進口胎牛血清、細胞因子、ELISA試劑盒、細胞、抗體、生物試劑、耗材、培養基、一抗、二抗、其產品吸附均勻,吸附性好,空白值低,孔底透明度高,代做ELISA實驗等。完善的庫存及供應體系以及高效穩定的純化技術,保證產品均能現貨供應和產品質量的穩定性。

      怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養條件?
      ATCC(American Type Culture Collection)收集了絕大多數細胞的詳細資料。打開ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈接,輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數據庫。數據庫中有每一種細胞的詳細描述,包括細胞的來源,培養和凍存條件,以及相關文獻等資料。
      如何選用特殊細胞系培養基?
      培養某類型細胞沒有固定的培養條件。MEM中培養的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣容易生長??傊?,*MEM、DMEM做貼壁細胞培養;RPMI1640做懸浮細胞培養;各種目的無血清培養*AIMV培養基(SFM)。

      測序實驗流程:
      1 收集樣品
      2 相關試劑 總RNA提取試劑TREzol Reagent (RNA提取試劑), M-MLV(cDNA逆轉錄酶), RNA 純化試劑, RealqPCR MasterMix (熒光定量PCR預混試劑)。
      3 實驗儀器 熒光定量PCR儀; PCR儀;低溫離心機。
      4 總RNA提取
      5 cDNA合成 在0.5ml的離心管中加入1µl模板總RNA(1µg/µl); 2µl隨機引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體系。混勻后70℃變性RNA 5分鐘,冰上速冷1分鐘,離心將溶液收集至管底加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體系。PCR儀中反應條件設置 37℃延伸60min,70℃保溫15min終止反應。合成好的cDNA置于 -20 ℃保存備用。
      6 引物設計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
      7 實時定量PCR 按以下反應體系進行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上游引物F 1 ul,下游引物R 1 ul;cDNA template 2ul。定量PCR儀擴增反應條件設置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環)。
      8 PCR產物溶解曲線分析 將所擴增的PCR 產物進行溶解曲線分析,單峰溶解曲線表示擴增產物單一,無非特異性擴增產物。溶解曲線生成的反應程序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

      細胞出現問題,可重發的情況有哪些?判定標準是什么?
       ?。?)細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、破損、漏液等,重發;
        (2)凍存的細胞復蘇后,絕大多數細胞未存活,重發;
       ?。?)存活的細胞靜置24小時后,絕大多數細胞未存活,重發;
       ?。?)凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封,出現污染,重發;
       ?。?)視具體情況而定。
      細胞出現問題,不予以重發的情況有哪些?
        (1)客戶造成細胞污染,不重發;
        (2)客戶不正確操作致細胞狀態不好,不重發;
       ?。?)細胞狀態不好,未提供細胞培養前3天照片的,不重發;
       ?。?)細胞培養時經其它處理的,不重發;
       ?。?)細胞收到2天內,未告知,不重發;
       ?。?)視具體情況而定。


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